U jednoj od studija, pokazalo se da duga intergenska protein nekodirajuća RNK520 (LINC00520), nova identificirana lncRNK, modulira maligni fenotip tumorskih ćelija u nekim malignim tumorima. Međutim, tačna uloga i molekulskii mehanizam LINC00520 u malignom melanomu nisu proučavani.[4]
Otkrili su da je LICN00520 prekomjerno eksprimiran u tkivu melanoma. Visoka ekspresija LICN00520 faktor je rizika za prognozu oboljelih od melanoma. LINC00520 promovira proliferaciju, invaziju i migraciju ćelija melanoma. LICN00520 je svoju onkogenu ulogu iskazao kompetitivnim vezanjem miR-125b-5p za podsticanje ekspresije eukariotskog faktora inicijacije 5A2 (EIF5A2). Također je pokazano da LICN00520 promovira rast i metastaze melanoma in vivo regulišući os miR-125b-5p/EIF5A2.[4]
Sveukupni rezultati razjasnili su ulogu i molekulski mehanizam djelovanja LINC00520 u malignom razvoju melanoma. LINC00520, novi onkogen u melanomu, možda služi kao biomarker preživljavanja ili terapijski cilj za pacijente sa melanomom.
Inače, maligni melanom je najopasniji tumor kože, koji je primarni uzrok smrti od raka kože. Posljednjih godina globalna incidencija melanoma svake godine brzo raste . Iako se pacijenti sa melanomom liječe kombinacijom hirurgije, hemoterapije, ciljane terapije i imunoterapije, terapijski učinak je i dalje nezadovoljavajući, posebno kod onih s udaljenim metastazama. Razvoj melanoma usko je povezan sa abnormalnom regulacijom višestrukih gena i signalnih puteva. Stoga je vrlo važno istražiti molekulski mehanizam malignog napredovanja melanoma i pronaći potencijalne terapijske ciljeve za melanom.
Dugolančana nekodirajuća RNK (lncRNK), tip je nekodirajuće RNK sa preko 200 nukleotida, ii ključnom ulogom u različitim ljudskim tumorima, modulirajući maligni fenotip tumorskih ćelija . Utvrđeno je da je nekoliko lncRNA abnormalno eksprimiranih u melanomu i uključeno u njegov maligni napredak. Gen za dugu intergensku protein nekodirajuću RNK 520 (LINC00520), smješten je na hromozomu 14, prekomjerno se izražavajući i djelujući kao onkogen kod karcinoma dojke, nazofarinksnog karcinoma i karcinoma pločastih ćelija grkljana. Također je pokazano da LINC00520 inhibira rast i metastaze kožnog karcinoma ploćastih (skvamoznih) ćelija.[4]
TRIzol reagens korišten je za ekstrakciju RNK iz ćelija i tkiva, prema navedenim koracima (Invitrogen, SAD). Kompleti za fermentacije i mikroRNK za obrnutu transkripciju (Applied Biosystems, CA) korišteni su za provođenje reverzne transkripcije. Reakcije pojačanja provedene su korištenjem ABI StepOnePlus sistema (Applied Biosystems, CA), u skladu s postavljenim reakcijskim uvjetima. Specijalni prajmer miR-125b-5p kupljen je od RiboBio (Guangzhou, Kina). GAPDH i U6 korišteni su za normalizaciju. Upotrijebljeni su sljedeći prajmeri:
LINC00520 prema naprijed 5′-CCTGCTCCTTCAGGGACATC-3′ i LINC00520 reverzni 5′-:TCCGCCCCTTGCTCAAATAG-3 ′; EIF5A2 naprijed 5′-TTCCAGCACTTACCCTT-3′ i
EIF5A2 naprijed 5′-TTCCCCTCTATTTTTG-3′; GAPDH naprijed 5′- GTCAACGGATTTGGTCTGTATT-3′ i :GAPDH natrag 5′- AGTCTTCTGGGTGGCAGTGAT-3′. Za izračunavanje relativnog nivoa ekspresije korištena je metoda 2–delta-delta.[4]
RIPA pufer (KenGEN, Kina) korišten je za ekstrakciju proteina, slijedeći odgovarajuće korake. BCA Protein Assay Kit (Beyotime, Kina) korišten je za mjerenje koncentracije ekstrahiranog proteina. Antitijela protiv EIF4A2 (Abcam, 1: 1000, Cambridgeshire, UK), vimentina (Abcam, 1: 2000, Cambridgeshire, UK), E-kadherina (Abcam, 1: 500, Cambridgeshire, UK), N-kadherina (Abcam, 1 : 1000, Cambridgeshire, UK) korišten je za srodni nivo proteina. Za normalizaciju korišćeni su β-aktin (1: 1000, Abcam, UK) i GAPDH (1: 2500, Abcam, UK).[4]
^ abcdeWenkang Luan, Yuting Ding, Haitao Yuan, Shaojun Ma, Hongru Ruan, Jinlong Wang, Feng Lu & Xuefeng Bu (20020): Long non-coding RNA LINC00520 promotes the proliferation and metastasis of malignant melanoma by inducing the miR-125b-5p/EIF5A2 axis. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 39, Article number: 96 [1]
