NOSIP
Protein u interakciji s dušik-monoksid sintazom je enzim koji je kod ljudi kodiran genom NOSIP.[5][6][7]
Kloniranje i ekspresija uredi
Korištenjem domena oksigenaze ljudskog ENOS (NOS3) kao mamca na 2-hibridnom ekranu kvasca u biblootetici posteljične cDNK, Dedio et al. (2001) klonirali su NOSIP. Izvedeni protein od 301 aminokiseline ima izračunatu molekulskuu masu od 34 kD. NOSIP dijeli 46% i 29% aminokiselinskih identiteta sa ortolozima C. elegans i A. thaliana. Northern blot analizom otkriven je 1,2 kb NOSIP-ov transkript koji je bio izrazito eksprimiran u ljudskom srcu i mozgu, s nižim nivoima u plućima i skeletnim mišićima. U bubrezima, jetri, gušterači i slezeni nije otkrivena bilo kakva ekspresija. Imunohistokemijska analiza pacovskovg srca otkrila je obilnu ekspresiju Nosipa u endotelnim ćelijama srčane mikrovaskulature. Western blot analiza ljudskih vaskulsdkih endotelnih ćelija pokazala je NOSIP pri prividnoj molekulskoj masi od 34 kD.
Aminokiselinska sekvenca uredi
- Simboli
C: Cistein
D: Asparaginska kiselina
E: Glutaminska kiselina
F: Fenilalanin
G: Glicin
H: Histidin
I: Izoleucin
K: Lizin
L: Leucin
M: Metionin
N: Asparagin
P: Prolin
Q: Glutamin
R: Arginin
S: Serin
T: Treonin
V: Valin
W: Triptofan
Y: Tirozin
| 10 | 20 | 30 | 40 | 50 | ||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| MTRHGKNCTA | GAVYTYHEKK | KDTAASGYGT | QNIRLSRDAV | KDFDCCCLSL | ||||
| QPCHDPVVTP | DGYLYEREAI | LEYILHQKKE | IARQMKAYEK | QRGTRREEQK | ||||
| ELQRAASQDH | VRGFLEKESA | IVSRPLNPFT | AKALSGTSPD | DVQPGPSVGP | ||||
| PSKDKDKVLP | SFWIPSLTPE | AKATKLEKPS | RTVTCPMSGK | PLRMSDLTPV | ||||
| HFTPLDSSVD | RVGLITRSER | YVCAVTRDSL | SNATPCAVLR | PSGAVVTLEC | ||||
| VEKLIRKDMV | DPVTGDKLTD | RDIIVLQRGG | TGFAGSGVKL | QAEKSRPVMQ | ||||
| A |
Funkcija gena uredi
Koristeći uzajamnu koimunoprecipitaciju i Western blot analizu, Dedio i et al. (2001) potvrdili su interakciju između ENOS i NOSIP u kotransficiranim COS-7 ćelijama. Delecijska analiza pokazala je da je NOSIP vezao C-terminalni dio domena ENOS-oksigenaze u regiji koja se preklapala sa mjestom vezanja za kaveolin plazmamembrane. Prekomerna ekspresija NOSIP-a smanjila je proizvodnju dušik-oksida stimuliranu kalcijem u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO) koje eksprimiraju ENOS. Prekomerna ekspresija NOSIP-a također je smanjila lokalizaciju ENOS-a u membrani ćelija CHO, uzrokujući prelazak sa frakcija membrane bogatih kaveolinom u unutarćelijske odjeljke. Dedio et al. (2001) zaključili su da NOSIP promovira translokaciju ENOS-a iz plazemamembrane na unutarćelijska mjesta, čime inhibira sintezu dušik-oksida. Koristeći afinitetnu hromatografiju i masenu spektrometrijsku analizu, Hoffmeister et al. (2014) otkrili su da je Nosip miš stupio u interakciju sa kompleksom proteinske fosfataze-2A (PP2A) koji sadrži katalitske podjedinice Pp2aca (PPP2CA) i Pp2acb (PPP2CB), podjedinicu skele Pr65-alfa (PPP2R1A) i regulatornu podjedinicu Pr55-alfa (PPP2R2B). Eksperimenti s povlačenjem proteina potvrdili su da je Nosip taložio holoenzim PP2A. Analiza ubikvitinacije in vitro pokazala je da je Nosip djelovao kao E3 ubikvitin-ligaza u monoubikvitinaciji katalitske podjedinice PP2A. Monoubikvitinacija nije uzrokovala proteasomsku degradaciju PP2A, ali izgleda da je smanjila aktivnost PP2A, putem nerazgradivog mehanizma.
Životinjski model uredi
Koristeći carski rez, Hoffmeister et al. (2014) dobili su mišje embrione Day-18,5 Nosip –/– u mendelovskom omjeru, ali svi su umrli nedugo nakon rođenja, sa znakovima respiratornog distresa i cijanoza, vjerovatno zbog poteškoća s disanjem uzrokovanih ozbiljnim kraniofacijalnim malformacijama. Malformacije u miševa Nosip –/– kretale su se od očnog hipotelorizma, uske njuške, bočnog rascjepa usne i rascjepa sekundarnog nepca, do ciklopije i prisustva proboscisa ili pojedinačne izbočine nalik glavi bez likova lica. Analiza morfologije prednjeg mozga kod miševa Nosip –/– pokazala je karakteristična obilježja holoprosencefalije. Hoffmeister et al. (2014) otkrili su da je nedostatak Nosipa u tkivima Nosip –/– - nepca i lica, ali ne i u neoštećenom tkivu Nosip –/– pluća, povezan s povećanom aktivnošću PP2A.[8][9]
Reference uredi
- ^ a b c GRCh38: Ensembl release 89: ENSG00000142546 - Ensembl, maj 2017
- ^ a b c GRCm38: Ensembl release 89: ENSMUSG00000003421 - Ensembl, maj 2017
- ^ "Human PubMed Reference:". National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine.
- ^ "Mouse PubMed Reference:". National Center for Biotechnology Information, U.S. National Library of Medicine.
- ^ Dedio J, Konig P, Wohlfart P, Schroeder C, Kummer W, Muller-Esterl W (Jan 2001). "NOSIP, a novel modulator of endothelial nitric oxide synthase activity". FASEB J. 15 (1): 79–89. doi:10.1096/fj.00-0078com. PMID 11149895. S2CID 34485514.
- ^ Lai CH, Chou CY, Ch'ang LY, Liu CS, Lin W (Aug 2000). "Identification of novel human genes evolutionarily conserved in Caenorhabditis elegans by comparative proteomics". Genome Res. 10 (5): 703–13. doi:10.1101/gr.10.5.703. PMC 310876. PMID 10810093.
- ^ "Entrez Gene: NOSIP nitric oxide synthase interacting protein".
- ^ Dedio, J., Konig, P., Wohlfart, P., Schroeder, C., Kummer, W., Muller-Esterl, W. NOSIP, a novel modulator of endothelial nitric oxide synthase activity. FASEB J. 15: 79-89, 2001. [PubMed]: 11149895
- ^ Hoffmeister, M., Prelle, C., Kuchler, P., Kovacevic, I., Moser, M., Muller-Esterl, W., Oess, S. The ubiquitin E3 ligase NOSIP modulates protein phosphatase 2A activity in craniofacial development. PLoS One 9: e116150, 2014. Note: Electronic Article. [PubMed]: 25546391
Dopunska literatura uredi
- Schleicher M, Brundin F, Gross S, et al. (2005). "Cell cycle-regulated inactivation of endothelial NO synthase through NOSIP-dependent targeting to the cytoskeleton". Mol. Cell. Biol. 25 (18): 8251–8. doi:10.1128/MCB.25.18.8251-8258.2005. PMC 1234313. PMID 16135813.
- Andersen JS, Lam YW, Leung AK, et al. (2005). "Nucleolar proteome dynamics". Nature. 433 (7021): 77–83. doi:10.1038/nature03207. PMID 15635413. S2CID 4344740.
- Dreyer J, Schleicher M, Tappe A, et al. (2005). "Nitric oxide synthase (NOS)-interacting protein interacts with neuronal NOS and regulates its distribution and activity". J. Neurosci. 24 (46): 10454–65. doi:10.1523/JNEUROSCI.2265-04.2004. PMC 6730309. PMID 15548660.
- Gerhard DS, Wagner L, Feingold EA, et al. (2004). "The status, quality, and expansion of the NIH full-length cDNA project: the Mammalian Gene Collection (MGC)". Genome Res. 14 (10B): 2121–7. doi:10.1101/gr.2596504. PMC 528928. PMID 15489334.
- Ota T, Suzuki Y, Nishikawa T, et al. (2004). "Complete sequencing and characterization of 21,243 full-length human cDNAs". Nat. Genet. 36 (1): 40–5. doi:10.1038/ng1285. PMID 14702039.
- Strausberg RL, Feingold EA, Grouse LH, et al. (2003). "Generation and initial analysis of more than 15,000 full-length human and mouse cDNA sequences". Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99 (26): 16899–903. doi:10.1073/pnas.242603899. PMC 139241. PMID 12477932.